SimoneHis标签蛋白纯化步骤
的有关信息介绍如下：
在重组表达的目的蛋白上加入标签，可以更方便、高效的实现目的蛋白的纯化。下面就以Abbkine的His标签纯化填料和预装柱为例，详细说明操作步骤。
1、离心收集500ml表达目标蛋白的大肠杆菌，冻融或超声破菌于20ml破菌缓冲液。这一步可以适当加入PMSF作为蛋白酶抑制剂，但是不能使用EDTA。还原剂使用2mM2-ME，避免使用DTT，因为DTT会造成Ni/Co离子还原。
2、离心取上清，上样于预先平衡好的纯化柱（10倍柱体积上样缓冲液平衡），通常自然流速可以很好结合。少数情况下，流速过慢，可以使用硅胶管控制上样速度。
3、样品上完以后，使用上样缓冲液洗柱10个柱体积，注意将纯化柱侧壁上的残留样品洗干净。
4、使用10-20倍柱体积洗杂缓冲液将杂蛋白从纯化柱上洗去，如果杂蛋白太多可以加大洗杂体积。
5、洗杂结束以后，使用4-10倍柱体积洗脱缓冲液将目标蛋白洗脱。通常目标蛋白会在第二个柱体积中开始流出。
6、收集完成以后，使用8M尿素或者6M盐酸胍5倍柱体积洗柱，再使用大量蒸馏水水洗柱，封闭纯化管上下两端保存在4℃，不要在-20℃冻结。如果长期不用，加入5ml20%乙醇封闭保存。
