怎样配制HA-HI试验用四单位抗原
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HA-HI试验是测定血清抗体滴度的常规方法,试验的原理是抗原抗体中和反应,是动物医学专业必须掌握的试验技能。那么,在这个试验中非常关键的一步就是配制四单位病毒抗原,那么如何正确的操作呢?下面是小编总结的一些试验过程和注意事项,供需要的朋友参考。
为什么要用四单位病毒
经过大量的试验数据显示,只有四单位的病毒抗原浓度才能最好的反应血清抗体的水平,四单位是人为规定的。
试验前准备
准备好配制四单位抗原所需的所有材料,包括病毒抗原、PBS缓冲液、1%鸡红细胞、单道和多道移液器及吸头、20ml青瓶及塞子、96孔微量血凝板等。
测定病毒的血凝滴度(HA试验)
如何测定病毒的血凝滴度,详见本小编的百度经验“血凝(HA)试验操作攻略”一文。
假设测得的血凝滴度为2的8次方,则四单位病毒的稀释倍数为2的6次方(2的8次方除以4),即64倍稀释。
计算抗原用量
根据所需的四单位抗原的总量来确定抗原液的用量。
比如,需四单位抗原总量为20ml,则利用公式:抗原原液*64(稀释倍数)=20ml,求出抗原原液的体积为0.312ml,需要PBS缓冲液的体积约19.7ml,根据计算的结果配置即可。
配制四单位抗原
取PBS缓冲液19.7ml,加入20ml的小青瓶中,取0.312ml的病毒抗原液,加入到缓冲液中,盖上塞子,充分混匀,最好用涡旋仪混匀,至此,四单位抗原配制完成。
使用
四单位抗原是进行HI试验必须的,使用前还要进行四单位的验证,验证成功后就可以用了。



